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煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸的生產(chǎn)方法
點(diǎn)擊次數(shù):1355 更新時(shí)間:2018-12-07

       煙酰胺腺嘌呤二核苷酸是一種轉(zhuǎn)遞質(zhì)子(更準(zhǔn)確來(lái)說(shuō)是氫離子)的輔酶,它出現(xiàn)在細(xì)胞很多代謝反應(yīng)中。NADH或更準(zhǔn)確NADH + H+是它的還原形式。它可以被還原,多攜帶兩個(gè)質(zhì)子(寫為NADH + H+)。NAD+是脫氫酶的輔酶,如乙醇脫氫酶(ADH),用于氧化乙醇。它在糖酵解、糖異生、三羧酸循環(huán)及呼吸鏈中發(fā)揮著不可替代的作用。中間產(chǎn)物會(huì)將脫下的氫遞給NAD,使之成為NADH + H+。而NADH + H+則會(huì)作為氫的載體,在呼吸鏈中通過(guò)化學(xué)滲透偶聯(lián)的方式,合成ATP。 在吸光方面,NADH+H+在260nm和340nm處各有一吸收峰,而NAD+則只有260nm一處吸收峰,這是區(qū)別兩者的重要屬性。這同時(shí)也是很多代謝試驗(yàn)中,測(cè)量代謝率的物理依據(jù)。NAD在260nm的吸光系數(shù)為1.78*104L /(mol*cm),而NADH在340nm的吸光系數(shù)為6.2*10? L/(mol*cm)。

生產(chǎn)方法:
1.從鮮酵母提取,步驟如下:新鮮壓榨酵母[破壁,提取]提取液[分離]濾液[一次吸附][洗脫]一次洗脫液[中和][二次吸附][洗脫][三次吸附][洗脫]三次洗脫液[沉淀][過(guò)濾][干燥]輔酶I
2.以酵母為原料
破壁、提取、分離 將新鮮壓榨酵母攪拌下加入等量的沸水,加熱至95℃保溫5min,迅速加入兩倍酵母質(zhì)量的冰塊,過(guò)濾,濾餅用水洗滌2次,合并濾液和洗液,加入強(qiáng)堿性季銨I型陰離子交換樹(shù)脂201×7(717),攪拌16h,過(guò)濾,收集濾液。
新鮮壓榨酵母[沸水、冰塊]→提取液[201×7樹(shù)脂]→濾液
吸附、洗脫 濾液用濃鹽酸調(diào)pH=2-2.5,經(jīng)弱酸性丙烯酸系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂122柱吸附,用無(wú)熱原水洗至流出液澄清為止,再用0.3mol/L氫氧化銨溶液洗脫,當(dāng)流出液呈淡咖啡色,經(jīng)340nm分光光度計(jì)測(cè)定吸光度大于0.05時(shí),開(kāi)始收集,流出液呈淡黃色時(shí)停止,得洗脫液。
濾液[pH2-2.5]→吸附物→洗脫液
中和、吸附 將強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂001×7(732)加至洗脫液中,攪拌測(cè)pH=5-7,過(guò)濾,濾餅用無(wú)熱原水洗滌,合并洗液和濾液,加稀氨水調(diào)pH值至7(約15%),再用強(qiáng)堿性季銨I型陰離子交換樹(shù)脂201×7 (717)50-60目柱進(jìn)行吸附,用無(wú)熱原水洗至流出液澄清無(wú)色為止。
洗脫液[001×7樹(shù)脂,氨水,201×7樹(shù)脂]→[pH7]吸附物
洗脫、吸附、洗脫 將766型活性炭60-80目柱與201×7樹(shù)脂柱串聯(lián),用0.1mol/L氯hua鉀溶液洗脫,洗脫液立即流經(jīng)活性炭柱進(jìn)行吸附,吸附完后解除兩柱串聯(lián),用pH9的無(wú)熱原水洗滌,再用pH8的4%乙醇洗滌,后用無(wú)熱原水洗至中性,用體積比為丙酮:乙酸乙酯:水:濃氨水=4:1:5:0.02的混合液洗脫,當(dāng)洗脫液加3倍丙酮產(chǎn)生白色渾濁時(shí),收集洗脫液。
吸附物[201×7樹(shù)脂柱,氯hua鉀,766型活性炭]→洗脫液[活性炭柱]吸附物[無(wú)熱原水,乙醇]→[洗至中性]吸附物[丙酮,乙酸乙酯,水,濃氨水]→洗脫液
沉淀、干燥 洗脫液在攪拌下加30%-40%硝酸調(diào)pH=2-2.5,過(guò)濾,冰庫(kù)過(guò)夜,過(guò)濾,95%的冷丙酮洗滌,真空干燥,得成品。
洗脫液[硝酸]→[pH2-2.5, 0℃]沉淀[丙酮]→[干燥]C0I成品。

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