咱們在運(yùn)用ELISA試劑盒96孔板的試驗(yàn)測定的時分，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)"，也就是外周孔顯色較基地孔深。經(jīng)研究證真實(shí)溫育中的熱力學(xué)梯度也許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在試驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃擺布）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與基地孔之間也許存在一熱力學(xué)梯度。因而運(yùn)用水浴或在將反響溶液參加至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地掃除“邊緣效應(yīng)"，而且可進(jìn)步測定的重復(fù)性。

    ELISA試劑盒還有就是在試驗(yàn)中，必定有運(yùn)用微量加樣器參加樣本的步驟。提示留意：加樣不行太快，要防止加在孔壁上部，不行濺出和發(fā)生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易致使非特異吸附。濺出會對附近孔發(fā)生污染。出現(xiàn)氣泡則反響液界面有區(qū)別。所以，有時分一份標(biāo)本用一樣的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，通常就是上述加樣及試劑的過錯所造成的。

    ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中，須特別注意一些細(xì)節(jié)問題，細(xì)節(jié)直接影響著試驗(yàn)的成功與否，以下是ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)八大忌諱，以供各位試驗(yàn)君參考：

    一、如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值），請先將樣本稀釋必定倍數(shù)（n倍）后再測定，核算時請zui終乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。

    二、ELISA試劑盒從冷躲環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝進(jìn)密封袋中保留。

    三、嚴(yán)厲依照說明書的操縱進(jìn)行，ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)成果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

    四、濃洗刷液可能會有結(jié)晶析出，ELISA試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗刷時不影響成果。

    五、本試劑不一樣批號組分不得混用。顯色劑B請避光保留。

    六、ELISA試劑盒一切樣品，洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。

    七、各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校正其正確性，以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時刻*控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)目多，引薦運(yùn)用排槍加樣。

    八、封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免穿插污染。